Среда ГибриС-8 с аланил-глутамином, 490 мл, ПЭТ
Представляет собой растворённую в деионизованной воде смесь минеральных солей, аминокислот, глюкозы, витаминов, антиоксидантов и рекомбинантных человеческих белков с pH-индикатором (феноловый красный), простерилизованную методом мембранной фильтрации. В состав ГибриС-8 не входят альбумин, фетуин и компоненты неопределенного состава (например, гидролизаты растительных или животных белков). Антибиотиков не содержит.
Препарат: Прозрачная жидкость красновато-оранжевого цвета без опалесценции и осадка.
Назначение: Среда используется для бессывороточного культивирования индуцированных плюрипотентных стволовых клеток (iPSC) и эмбриональных стволовых клеток (ES) без использования фидерного слоя. Обеспечивает пролиферацию и поддержание плюрипотентности клеток в течение длительных серий пассажей. Применяется в научных исследованиях в области клеточной биологии, генетики и регенеративной медицины.
Способ применения:
1. Вскрыть флакон со средой в асептических условиях;
2. Внести в среду Добавку к среде ГибриС-8 (50x), разбавив ее в отношении 1:50;
3. Внести в среду антибиотики (при необходимости).
Стволовые клетки, культивируемые в ГибриС-8, можно пассировать без контакта с сывороткой, используя трипсин и ингибитор трипсина из соевых бобов. Помимо этого, для пассирования можно использовать безферментный протокол, основанный на обработке клеток раствором Версена.
Для длительного рутинного культивирования в среде ГибриС-8 мы рекомендуем пассировать стволовые клетки небольшими агрегатами (диаметром 50–200 мкм), когда их колонии покрывают 60 – 70% доступной площади или когда в культуре вырастают очень крупные колонии с многослойной структурой в центре.
Для длительного рутинного культивирования в среде ГибриС-8 необходимо менять среду каждый день. Рекомендуется проводить пассаж стволовых клеток на различных коммерчески доступных белковых покрытиях для культурального пластика. небольшими агрегатами (50–200 мкм), когда их колонии покрывают 60–70 % доступной площади или когда в культуре вырастают очень крупные колонии с многослойной структурой в центре. При пассировании рекомендуется разбавлять суспензию клеток в соотношении от 1:3 до 1:12 в зависимости от желаемой плотности посева и режима ведения культуры. Допускается также пассирование одиночных клеток с добавлением ингибитора ROCK (Y-27632), но при этом возможно снижение жизнеспособности и плюрипотентности клеток.
Условия хранения: Хранить при температуре +2...+8 °C в защищённом от света месте. Добавку хранить замороженной при –10…–20 °C.
Результаты тестирования среды ГибриС-8 в условиях модельного эксперимента: В модельном эксперименте среда ГибриС-8 поддерживала рост iPSC минимум 8 пассажей. Через 5–7 дней после посева колонии увеличивались в 10–50 раз без признаков дифференцировки. Пролиферация сопровождалась сохранением морфологии и высокого индекса роста (ИП = 10,1).
