Среда Криодерм для криоконсервации на основе глицерина, 60 мл, ПЭТ
Представляет собой готовую к применению среду на основе глицерина, предназначенную для криоконсервации клеток. Обеспечивает защиту клеток от криоповреждений при замораживании и размораживании.
Препарат: Прозрачная жидкость красно-оранжевого цвета без опалесценции и осадка.
Назначение: Среда предназначена для использования в хирургии и офтальмологии при создании запасов жизнеспособных трансплантатов кожи и роговицы, в биотехнологии для криоконсервации клеток различных линий. Обеспечивает сохранение жизнеспособности клеток при поэтапном замораживании и последующем восстановлении культуры.
Способ применения:
-
Взять культуру с плотностью монослоя 70–80 % (для прикрепляемых культур) или с плотностью 50–70 % (для суспензионных культур);
-
Для прикрепляемых культур: ополоснуть клетки 5 мл 0,02 % раствора Версена, затем обработать 0,25 % раствором трипсина (5 мин. при 37 °C). Для суспензионных культур – клетки собрать пипетированием;
-
Инактивировать трипсин добавлением среды, содержащей 10 % сыворотки;
-
Центрифугировать при 1000 об/мин в течение 5 мин., удалить супернатант;
-
Ресуспендировать осадок из расчёта 1,2–1,5 млн. кл/мл;
-
Разлить суспензию по криопробиркам, герметично закрыть;
-
Замораживать поэтапно:
– сначала при температуре +2…+8 °C в течение 5 мин.,
– затем при –18 ± 2 °C в течение 24 часов.
Размораживание клеток:
-
Полностью разморозить пробирки при 37 °C;
-
Мягко ресуспендировать осадок и перенести в пробирку с 10 мл среды;
-
Центрифугировать при 1000 об/мин. в течение 2 мин., удалить надосадочную жидкость;
-
Ресуспендировать в 1 мл среды, содержащей 10 % сыворотки крови КРС;
-
Перед экспериментами провести 1–2 пассажа;
-
Полностью заменить среду через 1 сутки для удаления криопротектора;
-
При необходимости оценить жизнеспособность клеток окрашиванием трипановым синим.
Условия хранения: Хранить при температуре +2… +8 °С в защищённом от света месте. Транспортировать всеми видами крытого транспорта при тех же условиях.
