Криодерм - среда для криоконсервации клеток на основе глицерина предназначена для использования в хирургии и офтальмологии при создании запасов жизнеспособных трансплантатов кожи и роговицы, а также для криоконсервации клеток в биотехнологии.
Инструкция по применению
1. Взять культуру с плотностью монослоя 70-80% (для клеток прикрепляемых культур), или 50-70% плотности суспензии (для клеток суспензионных культур).
2. Снять клетки прикрепляемых культур с субстрата при помощи диссоциирующего 0,25 % раствора трипсина в течение 5 минут при 37оС (предварительно ополоснуть монослой клеток 5 мл 0,02% раствором Версена). Клетки суспензионных культур пипетировать и собрать в центрифужной пробирке.
3. Инактивировать трипсин при помощи среды, содержащей 10% сыворотки.
4. Осадить клетки центрифугированием 1000 об/мин в течение 5 минут. Удалить супернатант, не затрагивая клеточный осадок.
5. Ресуспендировать клетки в среде «Криодерм» из расчета 1,2-1,5 млн/мл.
6. Разлить приготовленную суспензию по криопробиркам, герметично укупорить замораживаемые образцы.
7. Замораживание проводят поэтапно – сначала криопробирки охлаждают при температуре 2±8оС в течение 5 минут, а потом помещают их в морозильную камеру при -18±2оС на 24 часа.
Размораживание клеток
- Полностью разморозить содержимое криопробирок при 37оС.
- Мягко ресуспендировать осадок клеток в криопробирке и внести весь объем образца в пробирку с 10 мл соответствующей культуре средой.
- Тщательно диспергировать клетки и центрифугировать при 1000 об/мин в течение 2 минут. Надосадочную жидкость слить, а полученный осадок ресуспендировать в 1 мл питательной среды, содержащей 10% сыворотки крови крупного рогатого скота.
- Перед экспериментом произвести 1-2 пассажа культуры в соответствующих условиях.
- Для максимального удаления криопротекторов рекомендуется произвести полную замену среды через 1 сутки после начала культивирования клеток.
- При необходимости, перед пассажем оценить количество жизнеспособных клеток в посевном материале при помощи окрашивания трипановым-синим.
Срок годности: 1 год
Условия хранения и транспортировки:
Хранить при температуре 2 - 8 оС в защищенном от света месте. Транспортировать всеми видами крытого транспорта при температуре 2- 8 оС.
Данный продукт предназначен для исследовательских целей.
